Paroksismal nokturnal hemoglobinüri (PNH), kompleman kaskadı, trombozlar ve kemik iliği yetmezliğine bağlı sitopenilerden kaynaklanan kronik intravasküler hemoliz ile karakterize edilen hematopoetik kök hücrelerin nadir ve yaşamı tehdit edici bir klonal bozukluğudur. X-bağlantılı gen PIG-A’yı inaktive eden bir klonun mutasyonel genişlemesinden kaynaklanır ve eritrositlerin (RBC), monositlerin ve granülositlerin yüzeyinde glikosil fosfatidilositol (GPI) ile bağlantılı proteinlerin eksikliğine yol açar. Bunlar, eritrosit yüzeyindeki iki kompleman düzenleyici proteini içerir: bir başka deyişle, CD55 (bozulma hızlandırıcı faktör – DAF) ve CD59 (reaktif lizis membran inhibitörü – MIRL). Bu iki proteindeki bir eksiklik, in vivo kırmızı kan hücrelerinin tahrip olmasına yol açar [1].

Tanı (Diagnosis)

PNH tanısı bir dizi laboratuvar testini içerir:

Negatif RBC ve WBC popülasyonlarını gösteren GPI bağlantılı antijenlerin akış sitometrisi
Pozitif Coombs testi
Retikülosit sayısının yükseldiği anemi
Laktat dehidrojenaz ve bilirubin artışı
Haptoglobin azalması
Serbest serum hemoglobin ve hemoglobinüri
Hemoliz ve/veya trombozdan kaynaklanan ilişkili organ hasarı [1].

DryFlowEx PNH Yüksek Hassasiyetli Test Kiti kullanılarak akış sitometrisi ile immünofenotipleme

Akış sitometrisi, PNH klonlarının tespiti için altın standart olarak kabul edilir ve dolayısıyla PNH’li hastaların tanı, izleme ve klinik yönetiminde önemli bir rol oynar. ICCS/ESCCA konsensüs kılavuzlarının en son güncellemesi [2'de özetlenmiştir], küçük PNH klonlarının bile hassas ve doğru bir şekilde tespit edilmesini sağlamaktadır.

DryFlowEx PNH Yüksek Hassasiyetli Test Kiti, kısmen FLAER (Alexa Fluor™ 488 etiketli proaerolisin) dahil edilmesi nedeniyle yüksek düzeyde tespit hassasiyeti sağlayan ICCS/ESCCA konsensüs kılavuzlarının bu en son güncellemesinin ardından geliştirilmiştir. FLAER, GPI ankorlarına bağlanır ve böylece, monositler ve nötrofil granülositler üzerinde, belirli bir CD belirtecinden bağımsız olarak bunların varlığının veya yokluğunun ölçülmesine olanak sağlar.

Kitte, hasta başına iki tüp sağlanır:

CD71, CD59 ve CD235a içeren RBC tüpü
Proaerolisin, CD157, CD45, CD64, CD24, CD14 ve CD15 içeren WBC tüpü

Her tüpün kokteylleri kuru reaktiflerdir, yani antikorlar tüp yüzeyinde kurutulur. Bu da raf ömrünün uzamasına ve oda sıcaklığında depolama ve teslime olanak sağlar. Numune hazırlama, geçitleme ve yorumlama ile ilgili ayrıntılar Kullanım Talimatında (IFU) ele alınmıştır.

ÖRNEK OLGU VE SONUÇLAR

19 yaşındaki Afrika kökenli Amerikalı bir kadın, öksürük ve koyu idrar şikâyetiyle acil servise başvurmuş, bunun dışında daha önce sağlıkla ilgili şikâyeti olmamıştır. Aile öyküsü incelendiğinde, kız kardeşine daha önce orak hücre taşıyıcılığı tanısı konulduğu görülmüştür.

Hematoloji sonuçları

Hematoloji laboratuvarına bir kan numunesi gönderilmiş ve burada XN Serisi analizör üzerinde tam kan sayımı yapılmıştır. Sonuçlar (Şekil 1) hastanın anemi yaşadığını göstermiştir.

Rerun	Order	Run	Test	Result	C	Unit
	I	2	CBC Profile
	I	2	HGB	90		g/l
	I	2	WBC	2,56		10*9/l
	I	2	PLT	69	&	10*9/l
	I	2	RBC	2,48		10*1…
	I	2	HCT	0,277		l/l
	I	2	MCV	111,7		fl
	I	2	MCH	36,3		pg
	I	2	MCHC	325		g/l
	I	2	RDW-CV	19,9		%

			RET Profile
	R	2	RET#	70,7		10*9/l
	R	2	RET%	2,9		%
	R	2	RET-He	28,3		pg
	A	2	PLT-O	69		10*3/…

Şekil 1 XN Serisi analizörden elde edilen hematoloji laboratuvarı sonuçları.

Özetle, hastane içi referans aralıkları (parantez içinde) gösterilen bu vakayla ilgili parametreler şu şekildeydi:

Hemoglobin	90 g/l	(115 – 155 g/l)
RBC	2,48 x 10¹²/l	(3,9 – 5,6 x 10¹²/l)
Hematokrit	0,277 l/l	(0,36 – 0,48 l/l)
Retikülosit sayısı	2,9%	(0,5 – 1,%)

Diğer testlerin sonuçları

Diğer laboratuvar testleri, aneminin otoimmün hemolitik özellikte olduğunu doğrulamıştır:

Laktat dehidrojenaz:	3170 U/l	(87 – 225 U/l)
Total bilirubin:	1,9 mg/dl	(0 – 1,2 mg/dl)
İndirekt bilirubin:	1,6 mg/dl	(0,2 – 0,7 mg/dl)
Pozitif direkt Coombs testi

Akış sitometrik immünofenotipleme sonuçları

Hasta, akış sitometrisi laboratuvarına PNH testi için örnekler gönderen bir hematoloji uzmanı tarafından görülmüştür. DryFlowEx PNH Yüksek Hassasiyetli Test Kiti kullanılarak immünofenotipleme gerçekleştirilmiştir. Verilerin analizi, GPI bağlantılı antijenlerin yokluğunu açıkça gösteren önemli bir RBC ve WBC PNH klonu göstermiştir.

RBC tüpü kullanılarak elde edilen eritrosit sonuçları %76,75 Tip III klonunu ve %2,54 Tip II klonunu ortaya çıkarmıştır (Şekil 2).

Şekil 2 DryFlowEx PNH Yüksek Hassasiyetli Test Kitinin RBC tüpü kullanılarak immünofenotipleme; XF-1600 üzerinde analiz edilmiştir

WBC tüpünün kullanıldığı lökosit sonuçları, %95 ile %97 arasında bir nötrofil granülosit klonu (Şekil 3) ve %98'lik bir monosit klonu göstermiştir (Şekil 4).

Şekil 3 DryFlowEx PNH Yüksek Hassasiyetli Test Kitinin WBC tüpünün kullanıldığı immünofenotipleme, XF-1600 üzerinde analiz edilmiş ve nötrofil granülositler üzerinde geçitlenmiştir

Şekil 4 DryFlowEx PNH Yüksek Hassasiyetli Test Kitinin WBC tüpünün kullanıldığı immünofenotipleme; XF-1600 üzerinde analiz edilmiş ve monositler üzerinde geçitlenmiştir

Bu bilgilerden hematolog, hastanın hem homozigoz (Tip III) hem de heterozigoz (Tip II) PNH formlarına sahip olduğunu tespit edebilmiş ve hastayı kompleman C5 proteinine bağlanan ve kompleman sisteminin aktivasyonunu inhibe eden bir immünoterapi olan Eculizumab’a başlatılmıştır [3]. Bu bağlanma, kan dolaşımındaki eritrositlerin parçalanmasını önler.

Son altı ay boyunca hastanın hemoglobin ve eritrosit sayısı normal aralıkta stabilize olmuş ve daha fazla hemolitik episod yaşanmamıştır.

REFERANSLAR

[1] Cançado RD et al. (2021): Consensus statement for diagnosis and treatment of paroxysmal nocturnal haemoglobinuria. Hematol Transfus Cell Ther; 43(3):341-348. doi: 10.1016/j.htct.2020.06.006.

[2] Illingworth AJ, Marinov I, Sutherland DR (2019): Sensitive and accurate identification of PNH clones based on ICCS/ESCCA PNH Consensus Guidelines-A summary. Int J Lab Hematol; 41 Suppl 1:73–81. doi: 10.1111/ijlh.13011. PMID: 31069981.

[3] McKeage K (2011): Eculizumab. Drugs; 71:2327–2345. https://doi.org/10.2165/11208300-000000000-00000

Klinik akım sitometrisi

İş akışı verimliliğinde yeni bir seviye için ince düşünülmüş otomasyon

Devamını oku

Flow cytometry antibody reagents

An extensive portfolio of high-quality flow cytometry antibody reagents for clinical diagnostic and clinical research applications.

Explore our portfolio

Bilimsel Takvim 2025

Aylık vakalarımızı